pcr反应分为哪三步 pcr反应的过程包括

时间:2021-04-11 12:14:57 作者:admin 7251

PCR的反应包括三个主要步骤?

1、变性:目的双链DNA片段在94℃或高温下解链为单链;

2、退火:目的基因片片段的5‘,3’端的引物在适当温度(一般为引物Tm值 5℃提高扩增的特异性)下与模板上的目的基因的5‘,3’端给合;

3、延伸:在TaqDNA聚合酶的作用下和引物的引导下将PCR反应体系中的A,G,T,C给合到模板上去,完成DNA片段的复制。产生一条新的DNA片段

PCR反应过程示意图?

聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)是体外酶促合成特异 DNA片段的 一种方法,为最常用的分子生物学技术之一。

典型的 PCR 由(1)高温变性模板;(2)引 物与模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反应组成一个循环,通过多次循环反应,使目的 DNA得以迅速扩增。其主要步骤是:将待扩增的模板 DNA 置高温下(通常为 93℃-94℃)使其变性解成单链;人工合成的两个寡核苷酸引物在其合适的复性温度下分别与目的基因两侧的两条单链互补结合,两个引物在模板上结合的位置决定了扩增片段的长短;耐热的 DNA聚合酶(Taq 酶)在 72℃将单核苷酸从引物的 3’端开始掺入,以目的基因为模板从 5’→3’方向延伸,合成 DNA的新互补链。

PCR反应包括什么?

PCR(聚合酶链式反应)技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性→退火→延伸三个基本反应步骤构成:

①模板DNA的变性:模板DNA经加热至93℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备。

②模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合。

③引物的延伸:DNA模板--引物结合物在72℃、DNA聚合酶(如TaqDNA聚合酶)的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基互补配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链。 重复循环变性→退火→延伸三过程就可获得更多的“半保留复制链”,而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2~4分钟,2~3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。

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